当前家禽疾病流行情况比较复杂,混合感染和继发症比较多见,临床症状和病理变化也是非典型的较多,所以实验室诊断是动物疾病诊断的重要措施。同时,对病原跟踪进行监测,能了解到疾病的流行动态。采样的部位、方法、样品的保存、运输都直接关系到最终的诊断结果,本文就家禽的病料采集小结了一些采集的原则及方法,仅供参考。
1 病料采集的原则
1.1 无菌采集
采集病料,应全程无菌操作。特别是,微生物检查、血清学检查涉及的样本。无菌采集的样品,使用的器械、容器等严格消毒处理,严格遵守相应的无菌操作流程。
为了进行病原体的分离, 病料应尽可能减少污染。 因此, 在尸体剖检前, 应将尸体浸泡在适宜消毒剂溶液中,既做了皮肤和羽毛的消毒又减少在剖检时羽毛和皮屑飞扬对病
料的污染。尸体剖检时需先采集样品,后剖检,以免人为污染。
1.2 典型性
选取家禽的典型性,家禽要未经药物治疗,发病症状典型有代表,此要求对细菌传染性疾病的检查尤为重要。
选取病料有典型性,尽可能多的含有病原体。准备采集病料前,需初步诊断可能感染的病害,侧重采集病原体常侵害部位。
1.3 适时性
根据检测要求及检测对象和检验项目的不同, 适当的采样时机,对检测结果很重要,因此样品采集有时间上要求,应严格按规定的规程时间范围取样。
采集病料时间,要把握得当。从鸡的尸体上取材料时,夏天不应迟于6--8h,冬季不应迟于12--24h。时间过长的,可能会导致病料组织腐烂,难以检测出应有的病原。必要时,应急宰早期发病的活体组织,自其身上获取病料组织。
尸体剖开腹腔时,第一时间采取病料,减少病料因暴露于空气中而造成的污染。
病料采集后, 如不能立刻进行检验, 应立即存放在冰箱中。
1.4 安全采集
采集样本过程中,应注意操作的安全性,避免人员受感染,防治病原菌扩散,扩大感染面积。
2 病料的采集方法
2.1 组织和实质器官的采集
病料的采集必须采用无菌操作。心、肝、脾、肺和肾等实质性器官要在打开胸腹后第一时间采取,应注意的是,切取的组织应该包括病变部分及相邻的健康组织。剖开腹腔后,必须注意肠管的完整,防止剪破肠道致使肠内容物污染组织器官。采集肝脏时注意不要弄破胆囊,以免胆汁污染组织器官。
2.2 液体病料的采集
血液、胆汁、脓肿液、渗出物等液体病料,使用灭菌吸管或注射器,经烫烙部位吸取病变组织的液体,将病料注入灭菌的离心管中,封好送检。
2.3 全血的采集方法
用灭菌注射器自鸡的心脏或翅静脉采血 2-5 毫升,注入灭菌试管中。一般在血液中加入少量的抗凝剂( 5% 的柠檬酸钠或肝素)。无菌抽血后缓慢混匀。
2.4 血清的采集方法
用灭菌注射器自鸡的心脏或翅静脉采血 1-2 毫升,注入灭菌试管中(青霉素瓶)摆成斜面,待血液凝固血清析出后,将血清吸出注入另一个灭菌试管中,备用;简便方法为灭菌注射器采血后抽出一定的空间,斜放静置析出血清,将血清注入1.5ml 小离心管中。
3. 病料的保存和处理
3.1. 采集的样品应一种样品放入一个密封袋或容器,立即密封,防止样品损坏、污染和
外泄等意外发生。
3.2 装样品的密封袋或容器应贴上标签,标签要防止因冻结而脱落,标签标明采集的时间、地点、号码和样品名称,并附上发病、死亡等相关资料(纸质或电子版),尽快送实验室。
3.3 根据样品的性状检验要求的不同,作暂时的冷藏、冷冻或其它处理。
4 病料的运送
4.1 因缺乏解剖及采集样品的相关条件,需要运送整禽尸体时,用温和型消毒液稍稍打湿羽毛(若无温和型消毒剂可省,切不可使用具有腐蚀性消毒剂),装入双层防漏性好的塑料袋完整包装,运送。 如果需要长途运输,事先要整个尸体放入冰箱冰冻过夜。
4.2 装在密封袋或容器中的病料应先密封,然后装入泡沫箱或者冷藏瓶中运送。运送过程中严禁倾覆。
4.3 运送的病料必须标明:送检单位、地址、送检病料的品种、性别、日龄、种类、数量、死亡日期、送检日期、检验目的、送检者姓名,并附临床病例摘要(发病时间、死亡情况、临床症状、产蛋及饮食情况、免疫和用药情况等)。
4.4 运送病料时,一定注意病料要低温保存 (需足够多的冰袋或干冰),供病毒学检验的样品,数小时内要送到实验室,只作冷藏处理,超过数小时的要冷冻处理,可将样品放入-20℃冰箱内冻结后再装入有冰袋或干冰的厚泡沫箱或者冷藏瓶内运送。
5 鸡常见疫病的样品采集
5.1禽流感的样品采集、保存和运输
禽流感病毒主要在呼吸道粘膜细胞内增殖。
5.1.1 病禽的样品采集 ( 1 ) 至少从5只濒死禽采集样品。样品包括: 泄殖腔拭子和气管拭子各5个; 气管和肺的混样 5个,肠管及内容物的混样5个; 肝、脾、肾和脑等组织样品各5个。采集方法: ①泄殖腔棉拭子: 将棉拭子插入泄殖腔并旋转,使粪便沾在拭子上,放在运输缓冲液中。②气管棉拭子: 活鸡采样时,将棉拭子插入活鸡的气管内,轻轻擦拭气管壁并放入缓冲液中。死亡动物采气管样品时,可在肺和气管离体情况下进行采集,应将棉拭子插入较深部位用力擦拭,并按上述方法将棉拭子放在运输缓冲液中。
③粪便样品: 可从活禽市场采取新鲜粪便,用棉拭子沾取粪便,并将采好的样品放在运输缓冲液中。( 2 ) 分别采集至少10个病鸡的血样。采集10只病禽的血样,使用一次性采血器,心脏或翅静脉采血,每只禽采血样2-3 ml,经离心或自然析出血清后,将血清移到指形管中。封好口,贴好标签。不同禽只的血样不能混合。
5.1.2 病死禽的样品采集 无发病禽时,可从死亡不久的病禽采样,采样要求同病禽。棉拭子单独放入容器,容器中盛放含有抗菌素的p H值为7.0- 7.4 的PBS 液。
5.2 鸡新城疫样品的采集、 保存和运输
新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分泌物和排泄物,以脑、脾和肺含毒量最高,骨髓含毒时间最长。
样品: 眼分泌物、泄殖腔拭子、脾脏、气管粘膜、脑等。
采取病料完成后,器械应先消毒再清洗,采取病料场地应彻底消毒,避免散播病原微生物,采集者用肥皂水洗涤再用消毒液洗手。要建立健全病料档案管理制度,详细记录病料采集、使用、保存和销毁情况。
附: 各种病料的采集部位
对于不同的疾病应采集不同的部位,不可盲目采集。列表中病料采集部位在前的表示发病时含毒量较高排位较前,采集病料应注意。