孙建涛 薛素强 潘金金 张青林
（广州市华南农大生物药品有限公司 技术服务部）
伴随家禽养殖规模不断扩大、集约化程度越来越高带来的结果就是家禽活动空间的相对减少以及环境性致病菌危害越来越大。当前环境中的条件性致病菌的危害已经成为家禽养殖业不可忽视的重要一部分。而沙门氏菌作为一种常见致病菌, 其既可通过垂直传播感染也可通过污染的饲料、器具、饮水等进行水平传播，其带来的危害越来越严重。笔者在临床中遇到1例由沙门氏菌引发的黄羽肉鸡60天龄感染发病的病例, 现报道如下：
2015年3月16日，广东江门地区一养殖户在林中饲养的20000 只三黄鸡发生以精神沉郁、食欲减退、腹泻、消瘦和零星死亡为主要症状的疾病，至3月20日已死亡200只。该群肉鸡1-3日龄，投喂开口药盐酸环丙沙星饮水；5日龄免疫新支二联弱毒苗和新支流灭活油乳苗；10日龄法氏囊饮水；12日龄免疫H5（Re-6+Re-7）灭活油乳苗；25日龄免疫H5（Re-6+Re-7）灭活油乳苗和新流二联灭活油乳苗；60日龄免疫H5（Re-6+Re-7）灭活油乳苗。鸡群开始发病时采用硫酸新霉素+强力霉素进行治疗，无明显效果；截止就诊时，鸡群病程约4d，死亡200余只。养殖户使用常用的多种抗生素效果微乎其微，病情无法控制，遂进行诊治。
1.临床表现：病鸡发病日龄60d，病鸡精神沉郁，采食量减退，消瘦，胸骨弯曲，行动迟缓，瘫痪，双翅下垂，缩头闭目，羽毛松乱，严重腹泻，起初排黄白色糊状粪便，继而排水样稀粪，肛门周围被粪便污染，呈绿色糊状污秽，后期多因因衰竭而死亡。
2.剖检变化：剖检病死鸡30 只，病鸡心冠有出血斑点、表面有大量白色结节，肝脏肿大、褪色，质脆易碎，偶见菜花样大坏死灶区，少数病例肝脏破裂，腹腔积有血块，脾脏肿大、有坏死结节呈斑驳状，肌胃表面有白色结节，肾脏淤血，肠道黏膜出血，有的肠黏膜脱落。
3.实验室诊断
3.1 细菌分离培养：无菌采集病鸡肝脏，用接种环划线于SS琼脂培养基表面，置37ºC温箱培养24h，培养基表面长出无色半透明，中心黑色或几乎全部黑色的菌苔，该生长特性与沙门氏菌的培养特性基本一致。然后再挑取单个菌落作进一步纯化培养，取纯化培养菌进行革兰氏染色, 挑取少许菌落在玻片上用生理盐水稀释，将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液染1min，水洗；滴加革兰氏碘液作用1min，水洗；滴加脱色酒精，约30秒，水洗；滴加沙黄复染液，复染1min，水洗，干后镜检。革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色
3.2 生化特性试验：用无菌接种环钩取纯化后的单个菌接种到微量发酵管内, 倒置管放37 ℃温箱, 观察2天。
3.3 药敏试验 选择14 种临床常见抗菌药物药敏片, 在LB琼脂平板上采用药敏纸片扩散法操作,37 ℃培养24h 观察结果。判定标准为：药物抑菌圈直径>20 mm 为高敏，15 ～ 20 mm 为中敏，10 ～15 mm 为低敏，<10 mm 为不敏感。
3.4 病毒的分离鉴定 取发病鸡的肝脏、脾脏、胰腺进行研磨, 加PBS稀释后制成悬液，反复冻融三次；7000转/分，离心15min；加入1万单位过滤好的抗生素；加入抗生素后置4℃作用1.5小时；7000转/分，离心15min；每胚0.2ml，接种10-11天龄SPF鸡胚。收获胚液进行HA检测，对HA阳性样品进行特异性检测；HA阴性者，将胚液继续接种鸡胚盲传，至少盲传至F3代。接种后鸡胚继续放在温箱中孵育,每隔24 h 观察鸡胚情况。
4.结果
4.1 病毒分离 HA阴性，也未出现死胚及其他异常现象,所接种鸡胚144小时后仍全部存活, 这样就排除该鸡群发病由病毒引起的可能性。
4.2 细菌分离 在SS琼脂平板上分离所得菌落较纯, 细菌菌落光滑、细小，在自然光下呈蓝灰色或灰白色闪光，整齐均一。革兰氏染色镜检呈阴性细长杆菌，没有芽孢，有聚集，偶见两个或多个连在一起。
4.3 药敏试验
表1 药敏试验结果
药物 不敏 低敏 中敏 高敏 抑菌圈直径
庆大霉素 √ 20
头孢呋辛 √ 27
四环素 √ 10
头孢曲松 √ 12
多粘菌素B √ 17
卡那霉素 √ 19
诺氟沙星 √ 15
左氟沙星 √ 10
头孢噻肟 √ 22
青霉素G √ 0
氯霉素 √ 0
阿米卡星 √ 10
复方新诺明 √ 0
5．治疗
从药敏实验结果来看，该菌对头孢类高度敏感，对氨基糖苷类药物和多粘菌素B中度敏感，对头孢曲松、四环素、诺氟沙星、阿米卡星、左氟沙星、复方新诺明、氯霉素、青霉素G、复方新诺明等不敏感或耐药。因此建议该养殖户马上采取如下措施：全群饮水中添加硫酸安普霉素可溶性粉，同时添加葡萄糖和口服补液盐，连续饮用4d，并紧急注射头孢噻呋钠；用药后第3天，鸡群采食量明显上升，死亡逐渐减少，精神逐渐恢复正常，病情得到控制。
6.体会
6.1 肉鸡沙门氏菌病的发生，多与养殖环境差相关，南方黄羽鸡饲养多数都在林间饲养，受场地卫生条件和气候变化影响比较大，还与饲料、饮水不洁有关，因此要预防本病，必须加强鸡场的饲养管理和环境卫生，保持饲料和饮水的清洁卫生。沙门氏菌要做好如下防控：1.种源净化：沙门氏菌是垂直传播性疾病，做好种禽的防疫工作尤为重要！种禽的健康直接关乎肉鸡的健康，因此要做好源头的防控工作。2.流通环节：禽苗在运输过程中也要注意器具、车辆的消毒卫生，严防细菌滋生蔓延！3.养殖环节：1d龄开口药的预防工作也要做好，选用合适的抗生素进行预防，譬如头孢类抗生素等的饮水、注射等；环境场地的卫生消毒工作；定期的预防性用药，掌握好疾病发生规律，定期选择性投药。
6.2 合理的用药：当前沙门氏菌病的治疗由于其在临床上用药的不合理性造成菌株耐药性的不断增加，现有的广谱抗生素和抗革兰氏阴性菌的抗生素的效果越来越差。本病例在发病过程中，曾使用左氟沙星、阿米卡星、强力霉素和氟苯尼考等多种临床常用药物，但治疗效果均不理想。因此选择药物要合理，要选择疗效确切、毒副作用少、使用途径方便及价格低廉并且配伍禁忌少的药物，同时要注意联合用药，选择协同作用强的药物组合。要密切用药后群体的反应情况，做好记录等。
7.参考文献
1. 陆承平.2001.兽医微生物学(第三版).北京：中国农业出版社.214-223.
2. 李健强,李六金. 1999.兽医微生物学实验实习指导. 陕西：陕西科学技术出版社.156-171.
3. 张永利,万献尧.2004.细菌耐药性研究进展.中国医师杂志.12:1721-1722.
4. 汪毅.2001鸡大肠埃希菌分离鉴定与药敏实验.上海畜牧兽医通讯,4: 18-19.