稀释疫苗之前应对使用的疫苗逐瓶检查，尤其是名称、有效期、剂量、封口是否严密、是否破损和吸湿等。对需要特殊稀释液的疫苗，应用指定的稀释液。其他疫苗一般可用生理盐水或蒸馏水稀释。稀释液应是清凉的，这在天气炎热时尤应注意。稀释液的用量在计算和称量时均应细心和准确。稀释过程应避光、避风尘和无菌操作，尤其是注射用的疫苗应严格无菌操作。稀释过程一般应分级进行，对疫苗瓶应用稀释液冲洗2～3次。稀释好的疫苗应尽快用完，尚未使用的疫苗也应放在冰箱或冰水桶中冷藏。
对于液氮保存的马立克氏病疫苗的稀释，更应小心，生产厂家有操作程序时，应严格按提供的程序执行，如无现成的程序，可参考如下的注意事项。
（一）一般性要求
1．液氮保存的疫苗必须有指定的专业技术人员负责保管和稀释。
2．定期测定和登记罐内的液氮量，液氮量不足时应及时补充。
3．液氮罐应存放于安全的地方，与宿舍、办公室、仓库等保持一定的距离。
4．带液氮罐领取疫苗时应由专车运送，不得用客运交通工具运送，如需经火车等长途运输，则必须征得有关部门的同意，并采取相应防范措施后再作运输。
(二)疫苗的稀释过程
1．操作者应先戴好防护面具和手套。
2．稀释液平时应于4℃保存，稀释前稀释液温度应为15～27℃（按厂家规定办）。
3．按疫苗厂家的要求，准备好15～27℃的水浴箱（桶）以及长柄钳1～2支、冰块、托盘、水桶、自来水、注射器、18号针头等备用。
4．打开液氮罐，取出一支疫苗后迅速将其余疫苗放回液氮罐内。
5．立即将已取出的疫苗放入上述已准备好的温水浴中，使疫苗迅速解冻。
6．待疫苗完全溶解后，立即取干布拭干，甩动疫苗瓶，使疫苗瓶颈部不含疫苗液。在尽可能远离操作者面部及身体的地方把疫苗瓶从颈部折断。
7．取注射器套上18号针头，抽取温度为15～27℃之间（按厂家规定办）的稀释液1ml～2ml，再将疫苗液抽入注射器内，轻轻混匀后注入稀释液瓶中，然后再抽取稀释液连续冲洗疫苗瓶2～3次，并将冲洗液加入到稀释液瓶中。
8．轻轻地摇动已加入疫苗的稀释液，使疫苗均匀地分布在稀释液中。
9．把稀释好的疫苗保持在15～27℃（按厂家规定办），在注射期间也应保持在这一温度范围内。
10．已稀释的疫苗必须在稀释后一小时内用完。
五、疫苗的接种途径
免疫接种时操作上的失误，是造成免疫失败的常见原因之一。不同免疫接种途径的优缺点及注意事项如下。
（一）饮水 饮水免疫避免了逐只抓捉，可减少劳力和应激，但这种免疫接种受影响的因素较多，操作过程应注意：
1．疫苗应是高效的活毒疫苗。
2．使用的饮水应是清凉的，水中不应含有任何能灭活疫苗病毒或细菌的物质。
3．在饮水免疫期间，饲料中也不应含有能灭活疫苗病毒和细菌的药物。
4．饮水中应加入0.1%～0.3%的脱脂乳或山梨糖醇,以保护疫苗的效价。
5．为了使每一只鸡在短时间内能均匀地摄入足够量的疫苗，在供给含疫苗的饮水之前2h～4h应停止饮水供应（视环境温度而定）。
6．稀释疫苗所用的水量应根据鸡的日龄及当时的室温来确定，使疫苗稀释液在1h～2h内全部饮完。
7．饮水器应充足，使鸡群2/3以上的鸡只同时有饮水的位置。
8．饮水器不得置于直射阳光下，如风沙较大时，饮水器应全部放在室内。
9．夏季天气炎热时，饮水免疫最好在早上完成。
（二）滴眼滴鼻 滴眼滴鼻免疫接种如操作得当，往往效果比较确实，尤其是对一些预防呼吸道疾病的疫苗，经滴眼滴鼻免疫效果较好。当然，这种接种方法需要较多的劳力，也会造成一定的应激，如操作上稍有马虎，则往往达不到预期的目的。应注意：
1．稀释液必须用蒸馏水或生理盐水，最低限度应用冷开水，不要随便加入抗生素或其他化学药物。
2．稀释液的用量应准确，最好根据自己所用的滴唧或针头事先滴试，确定每毫升多少滴，然后再计算疫苗稀释液的实际用量。
3．为使操作准确无误，一手一次只能抓一只鸡，不能一手同时抓几只鸡。
4．在滴入疫苗之前，应把鸡的头颈摆成水平的位置（一侧眼鼻朝天，另一侧眼鼻朝地），并用一只手指按住向地面的一侧鼻孔。
5．在将疫苗液滴加入眼和鼻以后，应稍停片刻，待疫苗液确已被吸入后再将鸡轻轻放回地面。
6．应注意做好已接种和未接种禽之间的隔离，以免走乱。
7．为减少应激，最好在晚上弱光环境下接种，也可在白天适当关闭门窗后，在稍暗的光线下接种。
（三）肌肉或皮下注射 肌肉或皮下注射免疫接种的剂量准确、效果确实，但耗费劳力较多，应激较大，在操作中应注意：
1．疫苗稀释液应是经消毒而无菌的，不要随便加入抗菌药物。
2．疫苗的稀释和注射量应适当，量太小则操作时误差较大，量太大则操作麻烦，一般以每只0.2ml～1ml为宜。
3．使用连续注射器注射时，应经常核对注射器刻度容量和实际容量之间的误差，以免实际注射量偏差太大。
4．注射器及针头用前均应消毒。
5．皮下注射的部位一般选在颈部背侧，肌肉注射部位一般选在胸肌或肩关节附近的肌肉丰满处。
6．针头插入的方向和深度也应适当，在颈部皮下注射时，针头方向应向后向下，与颈部纵轴基本平行。对雏鸡的插入深度为0.5cm～1cm，日龄较大的鸡可为1cm～2cm。胸部肌肉注射时，针头方向应与胸骨大致平行，插入深度雏鸡为0.5cm～1cm，日龄较大的鸡可为1cm～2cm。
7．在将疫苗液推入后，针头应慢慢拔出，以防疫苗液漏出。
8．在注射过程中，应边注射边摇动疫苗瓶，力求疫苗的均匀。
9．应先接种健康群，再接种假定健康群,最后接种有病的鸡群。
10．关于是否一只鸡一个针头及注射部位是否消毒的问题，可根据实际情况而定。但吸取疫苗的针头和注射鸡的针头则应绝对分开，尽量注意卫生以防止因免疫注射引起传染病的扩散或引起接种部位的局部感染。
（四）气雾免疫 可节省大量的劳力，如操作得当，效果较好，尤其是对呼吸道有亲嗜性的疫苗效果更佳，但气雾也容易引起鸡群的应激，尤其容易激发慢性呼吸道病。气雾免疫中应注意：
1．气雾前应对气雾机的各种性能进行测试，以确定雾滴的大小、稀释液用量、喷口与鸡群的距离（高度）、操作人员的行进速度等，以便在实施时参照进行。
2．疫苗应是高效的。
3．气雾前后几天内，应在饲料或饮水中添加抗菌药物，预防慢性呼吸道病。
4．疫苗的稀释应用去离子水或蒸馏水，不得用自来水、开水或井水。
5．稀释液中应加入0.1%的脱脂乳或3%～5%甘油。
6．稀释液的用量因气雾机及鸡群的平养、笼养密度而异，应严格按说明书推荐用量使用。
7．严格控制雾滴的大小，雏鸡用雾滴的直径为30μm～100μm，成鸡为5μm～30μm。
8．气雾期间，应关闭鸡舍所有门窗，停止使用风扇或抽气机，在停止喷雾后20min～30min，才可开启门窗和启动风扇（视室温而定）。
9．气雾时，鸡舍内温度应适宜，温度太低或太高均不适宜进行气雾免疫，如气温较高，可在晚间较凉快时进行。
10．鸡舍内的相对湿度对气雾免疫也有影响，一般要求相对湿度在70%左右最为合适。
11．实施气雾时，气雾机喷头在鸡群上空50cm～80cm处，对准鸡头来回移动喷雾，使气雾全面复盖鸡群，使鸡群在气雾后头背部羽毛略有潮湿感觉为宜。
（五）翼膜刺种 翼膜刺种可用于鸡痘疫苗的接种，一般每1 000羽份疫苗用25ml生理盐水稀释，用接种针（或注射器）蘸取疫苗稀释液，在鸡翅膀内侧无血管的翼膜处刺种，小鸡刺一针，大鸡刺二针。做翼膜刺种时，一定要确定接种针已蘸取了疫苗稀释液，使每一只被接种鸡接种到足量的疫苗。
（六）滴肛或擦肛 滴肛或擦肛免疫目前只用于强毒型传染性喉气管炎疫苗，在对发病鸡群进行紧急预防接种时，可将1 000头份的疫苗稀释于25ml～30ml生理盐水中，将鸡抓起，头向下肛门向上，用接种刷（小毛笔或棉拭子）蘸取疫苗在肛门黏膜上刷动3～4次。接种时应注意只能将疫苗稀释液擦在肛门上，不能让疫苗稀释液碰到鸡的皮肤或羽毛或落到地面上，造成环境污染和疾病的扩散。